细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老，指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：

1）不可逆的生长停滞，细胞体积变大；

2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。

作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内SA-β-gal在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的SA-β-gal的细胞数目逐渐增加。

艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒提供了一种易于使用和有效的方法来确定细胞

衰老。SA-β-半乳糖苷酶催化X-gal的水解，产生蓝色。每个试剂盒提供足够的量在35毫米培养皿中进行多达50次检测。

艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒套件组件：

1.100X固定液（部件号40010）：一个试管–1.5 mL 25%戊二醛

2.染色溶液A（部件号40011）：一管-1.5ml 500mM亚铁氰化钾

3.染色溶液B（部件号40012）：一个试管–1.5 mL 500 mM铁氰化钾

4.染色溶液C（部件号40015）：一瓶-4.5mL 1M柠檬酸盐-Na 2 HPO 4缓冲液，pH

6，50毫米MgCl 2

5.染色溶液D（部件号40016）：一瓶-4.0ml 5M NaCl

6.X-gal溶液（部件号40014）：两个试管-每个试管中DMF中1.5 mL 40 mg/mL X-gal

艾美捷细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒分析方案（35mm皿）：

1.从表达SA-ß-Gal的衰老细胞中吸出培养基。

2.用3 mL 1X PBS洗涤细胞两次，并吸出最终洗涤液。

3.加入2mL 1X固定溶液。在室温下孵育5分钟。

4.取出固定溶液，用3mL 1X PBS洗涤固定细胞三次。

5.吸入最后一次洗涤液，并通过添加2 mL新鲜制备的细胞完全覆盖细胞染色工作溶液。

6.在37ºC避光条件下培养细胞4小时至过夜。

7.取出细胞染色工作溶液，然后用3 mL 1X洗涤染色细胞两次PBS并将细胞储存在1X PBS中。对于长期储存，用1X PBS覆盖细胞20%甘油。储存在4ºC。

注：通过将染色样品与DMSO。

8. 使用光学显微镜计数蓝色染色的衰老细胞。

部分引用文献：

1. Huang, Y. et al. (2022). The impact of senescence on muscle wasting in chronic kidney disease. J

Cachexia Sarcopenia Muscle. doi: 10.1002/jcsm.13112.

2. Sanagawa, A. et al. (2022). Effect of Replicative Senescence on the Expression and Function of

Transporters in Human Proximal Renal Tubular Epithelial Cells. Biol Pharm Bull. 45(11):1636-

1643. doi: 10.1248/bpb.b22-00322.

3. Okawa, R. et al. (2022). The effects of continuous exposure to low-dose chlorine dioxide gas on

the characteristics of induced pluripotent stem cells. Regen Ther. 21:250-257. doi:

10.1016/j.reth.2022.07.014.